安康亲子鉴定机构上海
24H免费服务 400-025-1120400-025-1120
上海
安康亲子鉴定机构

【未读消息】立即查看

1

混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定

作者:安康亲子鉴定机构

2020-04-07T16:09:40

来源:http://www.akbchina.cn  作者:安康亲子鉴定机构

直接问法医
    1、接到案件检材后,首先肉眼观察可疑斑痕,剪取少量斑痕置于载玻片上加一滴蒸馏水浸泡,并放于保湿盒内10分钟,充分使斑痕浸泡出来,干燥,甲醇固定,用酸性品红亚甲兰染色镜检,并确定有精虫。
 
    用两步法提取精虫DNA.分别剪取适量检材斑痕,用3mlTES浸泡10分钟,加300μlSDS及30μl PK,充分混匀后放入37℃水浴中孵浴90分钟,在第一步消化女性成分中,中间补加20μl PK,并每间隔15分钟混匀30秒。3500转离心10分钟,上清备用,沉渣再用蒸馏水洗涤3次,沉渣涂片镜检观察有精虫,用三种方法分别抽提DNA.
 
    2.取100μl沉渣于1.5ml管中,加400μl TES,50μl SDS及12μl PK和30μl DTT,置于37℃水浴中过夜,依次用等体积的饱和酚、等体积的1:1酚/氯仿,等体积的氯仿抽提,水相中加入2.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA,并置于-20℃冰箱中20分钟,离心去上清,用滤纸小心吸去残留在管壁的水分,加30μl去离子水充分混匀后置于100℃水浴中30分钟,即可进行PCR扩增检测。
混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定
    3.取100μl沉渣置于1.5ml管中,加200μl Chelex-100,12μl PK及30μl的DTT,充分混匀后置于100℃水浴中30分钟,12000转离心后,取上清进行PCR扩增检测。
 
    4.三种方法抽提的DNA与受害人、嫌疑人血样DNA一起同步扩增检测。PCR反应体系在20ul体系中进行。PCR缓冲液为50mmol/L KCL、10mmol/L Tris-Hcl、1.5mmol/L Mgcl、200mol/L dNTP,每组分别加0.5ulDNA,用本实验室自己合成的CSF1PO等14对引物进行检测,置于扩增仪中95℃4分钟后88℃条件下加入1u的DNA聚合酶,95℃15秒,60℃15秒,72℃45秒,循环14次,在90℃15秒,60℃15秒,72℃45秒循环16次,95℃5分钟后备检。
 
    5.聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳90分钟,AgNO3染色,碳酸钠显色。有机法提取DNA过程中,利用DNA只溶于水,而难溶于有机溶剂这一特性,用有机溶剂进行萃取,清除检材中脂类、色素、染料等,并使蛋白质(酶类)变性,使DNA得以浓缩纯化,但其有不能有效地祛除金属离子对扩增的影响及步骤繁琐,污染机会多,DNA损失等缺点;
 
    5%的Chelex-100法,是利用Chelex-100具有较强的金属离子亲和力,能彻底地螯和金属离子,清除金属离子对扩增的抑制,并防止DNA的降解,而且方法简便快捷,并在100℃煮沸30分钟的条件下使精虫细胞膜得以破裂,精虫DNA得到有效释放,其缺点是检材中的高浓度金属离子、色素、染料、脂类、蛋白质等成分不能清除,DNA未得到浓缩。
 
    以上就是混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定详情,如有更多疑问,欢迎在线详细咨询。
标签: 混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定,亲子鉴定,混合斑亲子鉴定

来源:http://www.akbchina.cn

在线咨询 在线咨询
用户评论
  • 检测结果
    黄先生 / ceo
    3分钟前

    一直担心孩子是不是在医院报错了,和我长得不像,在这儿检测结果是亲生,终于解开了心中的疑惑,感谢。

  • 胎儿亲子鉴定
    唐女士 / 微商
    11分钟前

    耿耿于怀很久了,终于鼓起勇气来这儿做了无创胎儿亲子鉴定,匿名委托的,客服保密做的不错~

  • 报告真实
    林先生 / 投资
    18分钟前

    终于拿到报告,顺利给孩子解决了上学难题。感谢这里工作人员,服务很周到,报告也管用~

  • 客户隐私
    宝娜杰
    26分钟前

    带女儿来这做过亲子鉴定,保密工作做得好,总体感觉不错~

  • 司法机构
    撒哈拉
    45分钟前

    网上查了价格,普遍好几千,这家机构,很正规,更放心。知道胎儿是老公的,养胎更安心了。

  • 服务态度
    蓝色优郁
    59分钟前

    服务态度周到,办事效率高,为了给孩子办理相关证件,我咨询了十多家鉴定机构,这家资质正规,更靠谱。

加载更多评论

国内服务平台

最近更新

沪ICP备18014489号-2 24小时免费服务热线:400-025-1120

地址:上海市浦东新区浦建路145号强生大厦

网站地图